新冠疫苗保护性评估有力工具假病毒_魅力滑翔_滑翔

COVID-19是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的急性病毒性疾病。自SARS-CoV-2大流行爆发以来，出现了多种变异株。年12月底，新冠变异毒株Alpha在英国被发现，英国的疫情一下子开始失控。紧接着，南非发现了Beta，印度发现了Delta，秘鲁出现了Lambda，各种变异新冠病毒如雨后春笋从世界各地冒出，疫情也进入更加紧张的时期。Alpha、Delta以及Lambda等流行突变株较以往毒株传播能力更强、病毒载量更高，免疫逃逸能力也有所增加，那么现有疫苗是否仍然具有保护性？如何对疫苗效价进行评估？在面临新冠突变株的挑战下，Moderna公布了其mRNA新冠疫苗，对包含Delta在内的多种新冠病毒突变株假病毒的中和能力研究结果。mRNA-疫苗接种者血清对不同新冠突变株的中和滴度数据实验结果显示，针对Delta病毒株，血清的中和滴度下降了2.1倍，针对Gamma病毒株，血清的中和滴度下降了3.5倍。在检测的突变株中，Beta（B.1.）病毒株和在安哥拉发现的A.VOI.V2病毒株导致血清中和能力下降最大，与对照病毒株相比，中和滴度最多下降了8.4倍。Beta（B.1.）病毒株导致血清中和能力降低幅度较大。因此，Moderna针对beta突变株开发了mRNA-.作为增强疫苗，在临床试验中显著提高了对beta突变株的中和能力。北京微生物流行病研究所，中国疾病预防控制中心等多单位使用假病毒系统，来验证接种了国药（BBIBP-CorV）或科兴疫苗（CoronaVac）的接种者血清中的中和抗体是否能抵抗新冠突变株。SARS-CoV-2假病毒在恢复期和接种者血清样本中的中和效果结果表明，Alpha突变株对血清中和活性几乎没有抵抗，而Beta突变株对血清的中和活性抵抗力更高（更容易逃脱免疫系统）。南非金山大学ShabirA.Madhi团队使用假病毒系统研究了ChAdOx1nCoV-19Covid-19疫苗对B.1.变异株的有效性。假病毒和活病毒中和试验结果研究结果表明，针对B.1.变异，ChAdOx1-nCoV-19疫苗的两次给药方案对轻度至中度Covid-19没有保护作用。为啥大家都用假病毒来验证疫苗效价呢？进行疫苗研发时，判断某种疫苗是否具有免疫效果，最重要的指标是在免疫机体后能否产生足够的中和抗体。包括Moderna、BioNtech的mRNA疫苗在内的诸多上市疫苗都在临床实验中进行了中和抗体实验，并将中和抗体滴度作为一项重要的评估指标。由于新冠病毒（SARS-CoV-2）具有很强感染性和致病性，SARS-CoV-2活病毒研究要求实验室安全级别达到P3以上，目前国内只有40多家P3实验室，大多属于CDC系统，非常规科研用途。再者传统方法如蚀斑形成试验耗时且通量低，大大限制了相关研究。因此，为了能在二级生物安全实验室进行新冠病毒的研究以及开发一种高通量的体外中和试验显得尤为重要，为了解决这一问题，研究人员构建了假病毒（Pseudovirus），假病毒能够模拟病毒入侵细胞的过程，且只能感染一次细胞，无自主复制能力，安全性高，可操作性强，可以实现高通量快速检测，广泛应用于病毒感染机制研究、单克隆抗体及抗病毒药物筛选和评价、血清中和抗体检测以及疫苗效价评估等领域。自新冠疫情爆发以来以及目前多种新冠突变株肆行，疫苗对于新冠突变株保护力如何亟待验证，近岸蛋白质研发出包括流行株Alpha、Delta以及Lambda在内的一系列突变株假病毒、S蛋白以及ACE-2过表达细胞株，可用于中和抗体检测和疫苗效价评估。近岸蛋白质假病毒（Pseudovirus）是基于慢病毒包装系统使用HEKT包装而成的SARS-CoV-2假病毒(NovoproteinCat.XCV01-XCV11)，病毒表面表达Spike蛋白，RNA核心为绿色荧光蛋白（GFP）或者荧光素酶（Luciferase）。该病毒可以特异性侵染ACE2表达的细胞(NovoproteinCat.XCC14)。病毒感染成功后细胞即发出绿色荧光或者是表达Luciferase，通过显微镜观察GFP或者酶标仪检测Luciferase数值来判定侵染效率。近岸蛋白质新冠假病毒特点：慢病毒系统采用三质粒包装系统使用HEKT包装而成的SARS-CoV-2假病毒，病毒表面表达Spike蛋白；复制缺陷型只能感染一次细胞，无自主复制能力，不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒，安全性高；可操作性强不需要P3实验室，仅需要在BSL-2实验室和ClassⅡ生物安全柜条件下进行，可实时进行检测；GFP报告基因显微镜观察GFP判定假病毒侵染效率，简单方便；Luc报告基因酶标仪检测Luciferase数值判定假病毒侵染效率，实现定量分析；种类齐全Alpha、Delta以及Lambda在内的一系列突变株假病毒可以任意挑选；数据结果：使用假病毒系统，近岸蛋白质验证了SARS-CoV-2(DG)假病毒侵染细胞的GFP效果以及Delta突变株的Luc效果。中和抗体抑制假病毒侵染细胞，荧光倒置显微镜拍摄感染后细胞荧光照片；不表达ACE-2的细胞不被侵染来源：

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